紫外分光光度計在使用測定法測定時，除另有規定外，應以配制供試品溶液的同批溶劑為空白對照，采用1cm的石英吸收池，在規定的吸收峰波長±2nm以內測試幾個點的吸收度，以核對供試品的吸收峰波長位置是否正確，除另有規定外，吸收峰波長應在該品種項下規定的波長±2nm以內；否則應考慮該試樣的真偽、純度以及儀器波長的準確度，并以吸收度大的波長作為測定波長。一般供試品溶液的吸收度讀數，以在0.3～0.7之間的誤差較小。儀器的狹縫波帶寬度應小于供試品吸收帶的半寬度，否則測得的吸收度會偏低；狹縫寬度的選擇，應以減小狹縫寬度時供試品的吸收度不再增加為準，由于吸收池和溶劑本身可能有空白吸收，因此測定供試品的吸收度后應減去空白讀數，再計算含量。用作鑒別和檢查項目的方法，分別按各品種項下的方法進行。鑒別項下吸收度讀數的范圍可根據配制供試液時的準確度及制劑的實際含量確定。紫外分光光度計用于含量測定的方法一般有以下幾種。
（1）對照品比較法
按各品種項下的方法，分別配制供試品溶液和對照品溶液，對照品溶液中所含被測成分的量應為供試品溶液中被測成分標示量的100±10%，所用溶劑也應*一致，在規定的波長測定供試品溶液和對照品溶液的吸收度后，按下式計算供試品中被測溶液的濃度： Cx＝（Ax/Ar）Cr 式中 Cx為供試品溶液的濃度；
Ax為供試品溶液的吸收度；
Cr為對照品溶液的濃度；
Ar為對照品溶液的吸收度。
（2）吸收系數法按各品種項下的方法配制供試品溶液，在規定的波長處測定其吸收度，再以該品種在規定條件下的吸收系數計算含量。用本法測定時，應注意儀器的校正和檢定。
（3）計算分光光度法采用計算分光光度法應慎重。本法有多種，使用時均應按各品種項下規定的方法進行。當吸收度處在吸收曲線的陡然上升或下降的部位測定時，影響精度的因素較多，故對照品和供試品測試條件應盡可能一致。若測定時不用對照品，如維生素A測定法，則應在測定時對紫外分光光度計作仔細的校正和檢定。紫外分光光度計波長有變動：儀器的校正和檢定由于溫度變化對機械部分的影響，儀器的波長經常會略有變動，因此除應定期對所用的儀器進行全面校正檢定外，還應于測定前校正測定波長。常用汞燈中的較強譜線237.83、253.65、275.28、296.73、313.16、334.15、365.02、404.66、435.83、546.07與576.96nm；或用儀器中氘燈的486.02與656.10nm譜線進行校正；鈥玻璃在279.4、287.5、333.7、360.9、418.5、460.0、484.5、536.2與637.5nm波長處有尖銳吸收峰，也可作波長校正用，但因來源不同會有微小的差別，使用時應注意。吸收度的準確度可用重鉻酸鉀的硫酸溶液檢定。取在120℃干燥至恒重的基準重鉻酸鉀約60mg，精密稱定，用0.005mol/L硫酸溶液溶解并稀釋至1000ml，按下表規定的波長處測定并計算其吸收系數。規定的吸收系數如下表，相對偏差可在±1%以內。
在一定范圍內測定：紫外分光光度計對溶劑的要求測定供試品前，應先檢查所用的溶劑在供試品所用的波長附近是否符合要求；即用1cm石英吸收池盛溶劑，以空氣為空白（即空白光路中不置任何物質）測定其吸收度，溶劑和吸收池的吸收度，在220～240nm范圍內不得超過0.40；在241～250nm范圍內不得超過0.20；在251～300nm范圍內不得超過0.10，在300nm以上時不得超過0.05。
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