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紫外分光光度法測定牛樟芝子實體的總三萜含量

更新時間：2018-10-18 點擊次數：3472

牛樟芝（Antrodia camphorate T.T.Chang & W.N. Chou）是中國臺灣一種罕見的藥用真菌，屬擔子菌門菌蔁綱無褶菌目多孔菌科薄孔菌屬，又名樟芝、樟菇、牛樟菇、紅樟芝、血靈芝，牛樟芝生長在中國臺灣*的牛樟樹的內部心材上。牛樟樹僅在中國臺灣生長，主要分布在海拔 450～2 000 m 的闊葉林中，生長緩慢。近年來，人工培養牛樟芝逐漸興起，主要有椴木栽培、液體培養、固體培養三種方法［1］。牛樟芝活性成分多種，其中已被鑒定的超過 200 種，主要有三萜、多糖及糖蛋白、類固醇、木脂素、苯醌衍生物、馬來酸和琥珀酸衍生物等［2］。現代研究表明：牛樟芝具有抗腫瘤、抗炎、抗氧化、保肝、預防肝纖維化、神經保護、舒張血管、抗高血壓等作用［3］。其中，三萜是牛樟芝的主要活性成分之一，也是牛樟芝苦味的主要來源，具有抗腫瘤、保肝、降血壓等作用［4］。本研究通過比色法測定人工培育牛樟芝子實體的總三萜含量，為牛樟芝子實體的開發利用提供一定的實驗依據。 1 儀器與材料 1.1 儀器 UV-1800 紫外可見分光光度計；1.2 材料熊果酸（純度≥98%，；香蘭素、高氯酸、冰乙酸、甲醇均為分析純

2 方法與結果 2.1 牛樟芝醇提物的制備牛樟芝子實體切片， 60℃干燥后粉碎，過 40 目篩，60 ℃干燥至恒重。取牛樟芝粉末 20 g，加入 400 mL 95%乙醇回流提取3 次，過濾，濾液濃縮干燥即得牛樟芝的醇提物。牛樟芝醇提物平均得率為（35.47±0.15）%，RSD 為0.4%。 2.2 供試品溶液的制備精密稱取牛樟芝醇提物 5 mg 加甲醇定容至 10 mL，配制成 0.5 mg／mL 的供試品溶液。 2.3 標準曲線的繪制精密稱取熊果酸 2.04 mg，加甲醇定容至 10 mL，得 0.204 mg／mL 的熊果酸對照品溶液。精密量取 0.1、0.2、0.3、0.4、0.6、0.8 mL 于試管中，水浴揮干，加 5%香草醛-冰乙酸溶液 0.2 mL、高氯酸 0.8 mL，60℃水浴 15 min，再冰水浴 5 min，加 5 mL 冰乙酸，搖勻后放置至室溫，于 510 nm 處測定吸光度。以濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標，繪制標準曲線，得線性回歸方程：Y＝4.16×10-2X－ 7.85×10-2，r 值＝0.999 1。熊果酸在 3.4～27.2 μg／ mL 范圍內線性關系良好。

2.4 方法學考察 2.4.1 精密度取濃度為 0.2 mg／mL 的對照品溶液，按 2.3 下的方法進行測定，平行 6 份，得 RSD 值為 2.34%，表明儀器精密度良好。 2.4.2 重復性取供試品 6 份，配制成 0.5 mg／mL 的待測溶液；取 600 μL 的供試品溶液，按 2.3 下的方法測定吸光度，計算三萜含量，RSD 值為 3.3%，表明重復性良好。 2.4.3 穩定性精密量取樣品，按 2.3 下的方法測定吸光度，每 15 min 測定 1 次，在 2 h 內顯色穩定， RSD 值為 1.77%，表明待測樣品溶液在 2 h 內穩定。 2.4.4 加樣回收率實驗取已知含量的供試品 6份，按照 1∶1 的比例加入一定量的對照品混勻，精密吸取混勻后的供試品溶液，按 2.3 下的方法測定吸光度，計算加樣回收率和 RSD 值，結果見表 1。計算得平均加樣回收率為 102.0%，RSD 為 1.96%，加樣回收率范圍 99.40%～104.63%，表明該方法具有良好的加樣回收率。

2.5 牛樟芝醇提物中總三萜的含量測定取牛樟芝醇提物粉末 5 mg，定容至 10 mL，即得 0.5 mg／mL 的供試品溶液；取 600 μL 樣品溶液，按 2.3 下的操作方法進行測定，計算醇提物中總三萜的含量，平行 3 份。測得牛樟芝醇提物中總三萜含量為（29.40± 0.97）%，相當于干品牛樟芝總三萜含量為 10.43%。 3 討論牛樟芝作為傳統藥物在中國臺灣民間用以解食物中毒、解酒、保肝、治療腹瀉及皮膚瘙癢等癥［5］。近年來由于牛樟芝的人工培養技術日漸成熟，迫切需要建立牛樟芝的質量評價標準，以為其開發利用提供理論依據［6］。三萜是牛樟芝子實體的重要活性成分之一，可作為評價其質量的重要指標之一。本文以熊果酸作為對照品，采用比色法對牛樟芝總三萜含量進行了測定，結果表明牛樟芝中總三萜含量高達 10.43%。該方法測定三萜重復性好，可作為評價牛樟芝子實體質量的方法之一。

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