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伴隨著分光光度計在各領域內廣泛應用，分光光度 計所起到的作用日益凸顯，但是部分單位對分光光度計原理了 解有限，所以本文就分光光度法、分光光度原理及應用進行分 析研究，希望能夠增加對分光光度法及分光光度計的了解 程度。

分光光度法是在比色法的基礎條件之上所發展出來的。 比色法在實際應用過程中，僅僅局限于應用在可見光驅內，但 是分光光度法能夠在紫外光與紅外光內去應用。比色法主要 應用單色光，所涉及到的譜帶寬度和整體精度都十分有限。分 光光度法與真正單色光較為貼近，光譜帶寬度不會超過35mm， 能夠對紫外區域內1mm以下進行檢測，具有良好的度。

1 光的基本知識 光主要是由光量子所構成，具有十分顯著的二重性，也就 是微粒不連續性與波動連續性，光在波長與頻率上面具有波動 特征，能夠通過 λ = c v 表示。其中 λ表示光所具有的波長，波長 為振動相同臨界點之間所具有的距離，v表示光頻率，也就是光 在每秒內振動的次數，c表示光傳播速度。 光屬于電磁波內的一種。在自然界內的電磁波類別較多， 電磁爐波長不同，分光光度法所應用到的光譜主要控制在 200mm與10 υ 之間，其中包含三個光驅，分別是紫外光區、可見 光區與紅外光區。

2 吸收光譜原理 分子在物質內運動可以分為三種形式，分別是電子運動、 分子內原子振動、分子自身轉動，所以一共具有三個能級，分別 是電子能級、振動能級、轉動能級。光在照射分子之后，分子將 會吸收光的能量，進而產生能級躍遷，也就是完成從基態能級 到激發能級的轉變。不同能級所需要的能量數量也不同，這就 需要應用不同電磁波進行激發。電子能級在躍遷過程中所需 要的能量要是越多，基本上都處于可見光區域或者是紫外光區 域內，這種光譜被稱之為紫外光及可見光光譜。分子在被紅外 線照射之后，分子所吸收到的能量無法完成電子能級的躍遷， 僅僅能夠讓分子完成振動能級與轉動能級之間的轉換，進而所 得到的光譜也就是紅外光譜。分子要是被比外紅外線光源進 行照射，分子僅僅能夠完成轉動能級的轉變，這樣所得到的光 譜為遠紅外光譜。物質所具有的結構要是不同，在完成能級躍 遷過程中所需要吸收的能量也就存在一定差異，對于光源吸收 速度也就不同，不同物質都具有自身特殊的光帶，進而人們就 能夠對不同物質進行分辨。這也是光度法在實際應用分析的 前提條件。按照郎伯比耳定律可知，溶液、溫度與光源波長在 相同情況之下，溶液內所具有的光密度與溶液厚度之間應該呈 現正比例關聯；要是溶液厚度要是一定的情況下，溶液濃度與 光密度僅僅具有關聯，被測物質濃度與吸光度之間呈現正比例 關聯，光度法在分析過程中就是應用該理論依據 。

3 分光光度計構造原理 復合光在經過分光系統之后，會分散成為不同波長的單色 光，對其中任意一個波長單色光進行分析研究，能夠對測試物 質光吸收能力進行判斷，這種方法就是分光光度法。分光光度 法在測量過程中所應用到的設備稱之為分光光度計。雖然分 光光度計型號存在一定差異，但是分光光度計的結構基本相 同，主要有五部分構成，分別是光源、單色器、樣品吸收池、檢測 系統與信號指示系統 。

3.1光源 能夠被作為光源的較多，例如鎢燈、鹵鎢燈、激光、紅外線 等。例如鎢燈要是作為光源，所產生的光譜為連續光譜，適合 在3600000nm 范圍內應用，在應用過程中具有良好的穩定性， 主要是作為可見光光源。

3.2單色器 單色器是分光光度計基礎構建，主要是將混合光源轉變為 單色光，同時為檢測提供針對波長光源。單色器主要由四部分 構成，分別是入口狹縫、出口狹縫、色散元件及準直鏡，其中 為重要元件為色散元件，色散元件還可以分為棱鏡與光柵兩種 類別。 3.2.1棱鏡 棱鏡主要作用是將混合光分解為單色光，正常情況下為三 角柱體。棱鏡要是由不同原材料生產而成，透光范圍也存在一 定差異。棱鏡要是應用玻璃制成，所得到的光譜就是可見光 譜；要是應用石英制成，所得到的光譜就是紫外光譜 。

3.2.2光柵單色器 光柵還可以作為單色器內的色散構建，主要是在金屬表面 上刻畫出多個槽，需要特別注意不同槽之間距離應該相等，并 且相互平行。光在經過槽反射之后，容易出現色散情況。部分 分光系統就是以光柵作為基礎理論，在玻璃或者是石英表面上 刻畫出多個槽，通過光干涉及衍射特征，完成混合光分散操作， 得到針對性光譜。

3.3 狹縫 狹縫主要表示光路上面由隔板所形成的縫隙，主要作用對 單色光強度及純度進行調節，同時也能夠對單色光分辨力造成 影響。狹縫寬度基本上控制在2mm之內，棱鏡分散能力也會根 據波長的改變發生變化，分光光度計所具有的狹縫寬度能夠與 棱鏡分散能力一共進行調整。

3.4 檢測器系統 盡速在光源照射之下會產生電流，光源強度要是越大，電 流數值也就會越高，也就是光電效應。檢測器系統主要是根據 檢測器所產生的光電流進行檢測，完成對數字結果的轉變。

4 結語 分光光度法與分光光度計在實際應用過程中，主要應用在 溶液內物質濃度檢測上面，通過分析溶液吸光度差異，能夠得 到不同溶液所具有的吸光度，進而繪制標準示意圖，這樣就能 夠了解未知溶液吸光度，進而了解未知溶液所具有的濃度，具 有良好的靈敏性與抗干擾性。