&

當(dāng)前位置：主頁 > 新聞中心 > 紫外分光光度計法測定茶葉中鄰苯基苯酚的含量

紫外分光光度計法測定茶葉中鄰苯基苯酚的含量

更新時間：2018-10-18 點擊次數(shù)：2661

食品的三大機(jī)能：營養(yǎng)學(xué)特性、嗜好性感官品質(zhì)特征、對人體的調(diào)節(jié)技能或保健機(jī)能。茶葉是為數(shù)不多的同時具備這三大機(jī)能要求的食品。茶不僅能夠帶給人們味覺的享受，還能夠促進(jìn)人們的身體健康，種種好處使得茶受到越來越多人的歡迎。飲茶、品茶已經(jīng)成為人們生活中*的一部分。隨著茶葉風(fēng)靡，越來越多人開始重視茶葉的質(zhì)量和安全問題。但是在茶葉的生長過程中，為了殺蟲除菌、提高增產(chǎn)率，不可避免的會使用到農(nóng)藥，農(nóng) 藥會殘留在茶葉上極難清除，也不可避免的會對環(huán)境和人類健康產(chǎn)生危害或者有潛在的威脅。有資料顯示，中國的茶樹除了有機(jī)茶被限制不能噴灑農(nóng)藥， 99%的茶樹都或多或少的噴撒了農(nóng)藥。現(xiàn)在世界上有近30億人飲用茶，世界各地都有種植茶葉和茶葉進(jìn)出口貿(mào)易，在如此大的需求面前，許多國家制定的農(nóng)藥殘留相關(guān)法規(guī)并沒有那么完善，大部分國家只標(biāo)明了茶葉中農(nóng)藥殘留的大標(biāo)準(zhǔn)，而并不是禁止農(nóng)藥殘留的存在。同時各個國家對茶葉的農(nóng)藥殘留相關(guān)的法律法規(guī)也不統(tǒng)一，例如，歐洲因為地域氣候關(guān)系不適合種植茶葉，同時對食品的安全衛(wèi)生要求更高，因此它對茶葉農(nóng)藥殘留的標(biāo)準(zhǔn)嚴(yán)格，
而中國的產(chǎn)茶量和出口量，但由于國外貿(mào)易壁壘日趨嚴(yán)格，導(dǎo)致了中國茶葉的出口量減少[1]，主要原因是因為中國關(guān)于茶葉農(nóng)藥殘留量的指標(biāo) 還未完善[2]。這幾年茶葉農(nóng)殘相關(guān)國家標(biāo)準(zhǔn)不斷更新出臺，可見茶葉中農(nóng)藥殘留問題越來越受到重視[3]。近五年，歐盟對茶葉相關(guān)法規(guī)進(jìn)行了多達(dá)69次修訂，茶葉農(nóng)殘標(biāo)準(zhǔn)限制對象已經(jīng)從茶園中使用的一般農(nóng)藥擴(kuò)展到草甘膦等除草劑，再到蒽醌、多氯酸鹽等環(huán)境污染物。近出口歐盟的茶葉中又查出鄰苯基苯酚這一防腐殺菌劑，鄰苯基苯酚是一種能夠致癌的物質(zhì)，對腎臟會產(chǎn)生毒副作用，危害人體健康，因此迫切需要建立一種，快捷的方法來測定茶葉中鄰苯基苯酚。鄰苯基苯酚，又叫做2-羥基聯(lián)苯(ortho-phenylpheno，簡稱OPP)，一般為白色片狀或塊狀，具有一定生物毒性。鄰苯基苯酚具備良好的殺菌殺毒能力，是常用的防腐劑之一，一般都用在對果蔬類的防腐和保鮮，或者是用于紡織品、橡膠制品、化妝品等當(dāng)中的消毒劑和防腐劑。目前， OPP殘留檢測的主要方法有液相色譜法[4-7]、氣相色譜法或氣相色譜-質(zhì)譜法[8-10]。色譜法分析成本高，色譜儀價格及日常維護(hù)費(fèi)用貴，分析時間一般比較長。而紫外檢測器是普遍的檢測途徑，大部分物質(zhì)在液體狀態(tài)下都有紫外檢測光譜，其吸光值和其濃度呈現(xiàn) 一定的線性關(guān)系，且不同的物質(zhì)的紫外峰基本都是峰，并且紫外分光光光度法適合大眾能夠做到的檢測方法，它還擁有分析成本低、紫外檢測儀價格及日常維護(hù)費(fèi)用低、準(zhǔn)確度高、使用方便等優(yōu)點。茶葉中因含有大量的營養(yǎng)物質(zhì)和化合物，增加了茶葉前處理的難度。而茶葉的前處理是整個分析過程的重要步驟，快速的提取方法更是茶葉中農(nóng)藥殘留分析的核心，直接影響后期檢測方法的準(zhǔn)確度。因此農(nóng)藥殘留分析茶葉的前處理要求提取率高，盡量少用或不用有機(jī)溶劑[11]，以減少污染。常見的樣品前處理方法主要有干法灰化法、固相萃取法、超聲波提取法等[12-14]，通過查閱文獻(xiàn)[15-20]，本實驗采用超聲波萃取法作為茶葉的前處理方法。超聲波提取法是利用超聲波強(qiáng)化提取作用，即媒質(zhì)產(chǎn)生*的機(jī)械振動作用和空化作用，機(jī)械振動作用將超聲波的能量傳遞給樣品，使組分脫附和溶解加快；空化作用使分子運(yùn)動加快[21]。超聲波提取法操作簡單，并且它擁有操作簡便、提取效率高，可克服常規(guī)方法的被測成分在多次轉(zhuǎn)移中損失，從而影響檢測準(zhǔn)確性的缺點。近年來超聲波提取法在茶葉的前處理中有著廣泛應(yīng)用[19-21]。本文將專門講述先用甲醇：水，甲醇，乙醇溶液分別為提取試劑，并采用超聲波萃取來提取茶葉中的鄰苯基苯酚，結(jié)合紫外分光光度計分析在不同緩沖液中，不同 pH值下鄰苯基苯酚的大吸收峰并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，通過計算加標(biāo)回收率確定方法的準(zhǔn)確性。從而建立了一種快速簡便地檢測茶葉中鄰苯基苯酚含量的方法。 1 實驗部分 1.1 實驗試劑與儀器 1.1.1 試劑 2-苯基苯酚，Rd，NanqiaoTwon， FengxianShanghai， China；甲醇，AR，國藥集團(tuán) 化學(xué) 試劑有限公司；乙醇，AR，國藥集團(tuán) 化學(xué) 試劑有限公司；茶葉，西湖龍井，浙江省杭州市 1.1.2 儀器設(shè)備紫外可見分光光度計，UV1901PC紫外可見分光光度計；電子天平， ML104/02，；超聲波清洗器，2 結(jié)果與討論 2.1 溶劑（萃取劑）的選擇鄰苯基苯酚微溶于水，因此選擇了三種不同極性的溶劑[22-23]（甲醇：水，甲醇，乙醇）來進(jìn)行比較選出溶劑。稱取鄰苯基苯酚，在其他制備條件保持不變的前提下，使用三種不同溶劑：甲醇：水（7:3）、甲醇、乙醇分別配制6滋g/mL，分別以不同溶劑作為空白進(jìn) 行基線的確定，在 190耀400nm波長范圍內(nèi)多次進(jìn)行光譜的連續(xù)掃描，并作出紫外峰來進(jìn)行比較。可知甲醇：水（7:3）紫外吸收峰，并采用其作為溶液的溶劑（萃取劑）。實驗結(jié)果可知，甲醇：水（7:3），甲醇，乙醇三種萃取劑的標(biāo)準(zhǔn)溶劑吸收曲線峰形一致，在其他條件不變的是情況下，甲醇：水（7:3）溶劑的紫外峰大吸收波長處的吸光值，更故采用甲醇：水（7:3）作為樣品的萃取劑。 2.2 OPP紫外檢測方法優(yōu)化 2.2.1 OPP大吸收波長的選擇吸取2滋g/mL的OPP溶液于比色皿中，以甲醇：水（7:3）溶劑作為空白進(jìn) 行基線的確定，在190耀400nm波長范圍內(nèi)多次進(jìn)行光譜的連續(xù)掃描，如圖（1），以確定 OPP的大吸收波長。圖（1）大吸收波長的確定由圖（1）可知，鄰苯基苯酚在190耀400nm 范圍內(nèi)，在 201.0、283.5nm波長處均有吸收峰，其中以201.0nm處的吸收峰，無雜峰干擾且較為穩(wěn)定，適合作為大吸收波長進(jìn)行實驗。 2.2.2 OPP適宜緩沖液的選擇在三組6滋g/mL的OPP溶液分別加入pH=8.5的不同的緩沖液（BR緩沖液， PBS緩沖液，醋酸緩沖液），分別加入于比色皿中，以甲醇：水（7:3）溶劑作為空白進(jìn)行基線的確定，在其他制備條件保持不變的前提下，在 190耀400nm 波長范圍內(nèi)多次進(jìn)行光譜的連續(xù)掃描，通過其紫外峰的大吸收峰來確定適宜的緩沖液。實驗結(jié)果可知，三種不同緩沖液（BR緩沖液， PBS緩沖液，醋酸緩沖液）對于OPP 標(biāo)準(zhǔn)液的影響的不同程度，其中醋酸緩沖液所得吸光值大，但因其大吸收波長處也導(dǎo)致偏離，故選用BR緩沖液作為OPP溶液的適宜緩沖液。 2.2.3 OPP適宜緩沖液pH值的選擇通過查閱文獻(xiàn)可知[24]，在酸性條件下,pH對OPP的紫外吸收影響不大，故在6滋g/mL的OPP溶液中加入pH值為6.5、 7、 7.5、 8、 8.5、 9、 9.5、 10的BR緩沖液，并測其大吸收峰。根據(jù)不同pH值測得的吸光度繪制pH值與吸光度的變化關(guān)系。得出6滋g/mLOPP標(biāo)準(zhǔn)溶液在不同pH值下BR緩沖液的吸光值，可知OPP標(biāo)準(zhǔn)溶液在pH=7.5下的吸光值。 2.3 OPP標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制從上述OPP儲備液（200.0滋g/mL）標(biāo)準(zhǔn)溶液中吸取 0.1、 0.2、 0.3、 0.4、 0.5、 0.6、1mL定容于 10mL容量瓶，配制 2、 4、 6、 8、10、 12、 20滋g/mL質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液。從2滋g/mL 標(biāo)準(zhǔn)溶液中吸取5mL 定容于 10mL 容量瓶中配制 1滋g/mL溶液。從20滋g/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液中吸取0.1、 0.25、 0.75mL定容至 10mL容量瓶中配制0.2、 0.5、 1.5滋g/mL溶液。從1滋g/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液中吸取0.2、 0.4、 0.6、 0.8、 1、 1.2mL 定容至 10mL 容量瓶中配制 0.02、 0.04、 0.06、 0.08、 0.10、 0.12滋g/ mL溶液。標(biāo)準(zhǔn)溶液均用甲醇：水（7:3）定容，采用緩沖液的pH值，并在大吸收波長處進(jìn)行紫外掃描得出 OPP 標(biāo)準(zhǔn)曲線并計算出線性相關(guān)系方程如圖（2）。
測定不同濃度鄰苯基苯酚標(biāo)準(zhǔn)品溶液在大吸收波長處的吸光值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（2），可知鄰苯基苯酚濃度與吸光度沒有呈直線關(guān)系，通過分析，取lgC為橫坐標(biāo)， A為縱坐標(biāo)，并擬合得到回歸方程： y=0.3x+1.505，線性相關(guān)系數(shù)為0.994。由（2）可以看出當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度在0.02耀12滋g/mL范圍內(nèi)，鄰苯基苯酚標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性關(guān)系良好。說明使用該曲線測定待測樣品的鄰苯基苯酚含量具有較高的準(zhǔn)確性。 2.4 樣品的預(yù)處理與測定 2.4.1 樣品的預(yù)處理稱取0.1g茶葉樣品，碾碎于離心瓶中加入甲醇：水（7： 3）萃取劑10mL，在超聲波清洗器中超聲提取20分鐘，將萃取劑倒出在10mL燒杯中備用。 2.4.2 樣品的測定和樣品加標(biāo)回收率的測定提取超聲后的萃取劑0.1mL稀釋至10mL,加入BR緩沖液，以甲醇：水（7:3）溶劑作為空白進(jìn)行基線的確定，作出樣品的紫外峰與OPP標(biāo)準(zhǔn)溶液的紫外峰圖進(jìn)行比較。量取上述稀釋后樣品溶液均勻液體試樣5mL，裝入比色皿中在大波長處進(jìn)行紫外掃描，確定空白樣品中OPP的含量。然后分別量取3份均勻液體試樣5mL，加入5mL質(zhì)量濃度為 0.5、 2、 8滋g/mL的OPP溶液。以甲醇：水（7: 3）溶劑作為空白進(jìn)行基線的確定，采用緩沖液的PH值，在大波長處進(jìn) 行紫外掃描。每組回收率測定 3次，取平均值進(jìn)行計算，計算結(jié)果如表1所示，由此可見，其加標(biāo) 回收率范圍在90.1%耀91.2%，回收率在正常范圍內(nèi)，符合加標(biāo)回收率的標(biāo)準(zhǔn)，證明方法是可行的。為確定茶葉中是否有其他物質(zhì)干擾影響實驗結(jié)果的測定，分別配制兒茶素、維生素C6滋 g/mL，取1mL裝入比色皿中，作出三種物質(zhì)的紫外吸收峰，和 OPP標(biāo)準(zhǔn)溶液的紫外峰圖進(jìn)行比較，觀察是否對大波長處的吸收峰有影響。實驗證明上述物質(zhì)對該檢測方法均無干擾。 3 總結(jié) 本實驗建立了茶葉中的鄰苯基苯酚含量的測定方法，具有準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性。利用甲醇:水（7:3）作為萃取劑，萃取方法選擇超聲波萃取法，萃取出茶葉中的鄰苯基苯酚，并采用紫外分光光度法，建立鄰苯基苯酚標(biāo)準(zhǔn)曲線對其進(jìn) 行含量測定，對標(biāo)準(zhǔn)曲線的萃取劑，緩沖液，適宜pH值等條件進(jìn)行優(yōu)化。在在 0.02耀12滋g/mL范圍內(nèi)，鄰苯基苯酚濃度與吸光度具有良好線性關(guān)系，其相關(guān) 系數(shù) 為 0.994，加標(biāo)回收率在90.1%耀91.2%之間，符合加標(biāo)回收率的標(biāo)準(zhǔn)，證明方法是可行的。結(jié)論為通過超聲波萃取結(jié)合紫外分光光度法能夠測定茶葉中鄰苯基苯酚，并且該方法具有準(zhǔn)確度高，反應(yīng)靈敏，操作簡便等優(yōu)點

上一篇：UV1901PC紫外分光光度計紫外254指標(biāo)的研究

下一篇：正己烷紫外分光光度法測定地表水中石油類的方法改進(jìn)